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基于細(xì)胞標(biāo)志物的流式分析

流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對照設(shè)計(jì)

2019-04-15 - 青木生物

未染色的細(xì)胞
確定背景和自發(fā)熒光的陰性對照;設(shè)置PMT電壓。

完全染色的細(xì)胞
確定一些超出坐標(biāo)軸的事件;設(shè)置PMT電壓。

單染的細(xì)胞/微球
調(diào)節(jié)補(bǔ)償

同型對照
設(shè)門,用于消除同類抗體的非特異性染色。每個(gè)抗體均會(huì)有不同水平的背景染色,這種背景與其結(jié)合特異性、抗體濃度、抗體聚集程度、熒光素:抗體比例等因素有關(guān)。挑選同型對照除了要選對物種、亞型,還需要看抗體的結(jié)合特異性、濃度等等各種因素。

 

 

 

熒光扣除對照(FMO)
設(shè)門,用于消除熒光滲漏熒光的背景。

多色實(shí)驗(yàn)時(shí),要檢測某個(gè)熒光通道的表達(dá)情況,由于熒光滲漏影響占主要,所以檢測時(shí)先將該通道的抗體去掉,檢測一下其它通道漏到此通道的背景熒光水平,進(jìn)行正確排除,從而幫助設(shè)門。

未刺激或未處理的樣本
實(shí)驗(yàn)陰性對照

陽性細(xì)胞(刺激或特殊藥物處理過的)
實(shí)驗(yàn)陽性對照

用細(xì)胞活性染色(例如PI等)標(biāo)記細(xì)胞
區(qū)分死、活細(xì)胞。