膜片鉗技術(shù)十個(gè)技術(shù)要點(diǎn)
動(dòng)作輕柔
當(dāng)將micropipette放置到holder上的時(shí)候，你可以很容易的在你和放大器（amplifier）“熱”電極之間產(chǎn)生電接觸。如果不與地面電位（electrical ground）連接的話，那么就像是一個(gè)巨大的觸角，會(huì)引起很大的噪音。這會(huì)造成一些放大器的損傷，尤其是如果你聚集了一些靜電噪聲的時(shí)候。利用空余的那只手接觸地面，或者在放置微管之前連接金屬絲到地面電位，后者可以在你作為法拉籠（Faraday cage，又稱靜電屏蔽籠，用以防止雜電場(chǎng)對(duì)膜片鉗放大器的探頭電路的干擾）一部分的時(shí)候減少噪音。
利用少許壓力
在靠近液體表面和接觸細(xì)胞之前要在微管溶液中施以4-6英寸的水壓，這可以通過(guò)膜片管holders另外的線路，用嘴更好——一個(gè)簡(jiǎn)單的U試管。這種電壓能可以讓bath中不留任何碎片，當(dāng)然吸液管溶液也必須十分干凈。
不用在意吸液管被打碎
每一步由于對(duì)操縱器和光學(xué)方面的感覺(jué)不同都會(huì)有所差別，在將吸液管定位在細(xì)胞附近的時(shí)候，剛開(kāi)始總是會(huì)打破幾個(gè)吸液管的，這是十分正常的。不要因此而沮喪，要分型一下每次做錯(cuò)的原因，這樣能獲得很快的進(jìn)步，而且在到下一步的時(shí)候依然要重復(fù)這個(gè)過(guò)程。
SUPERFUSION是開(kāi)還是不開(kāi)？
打開(kāi)Superfusion會(huì)導(dǎo)致一些化學(xué)物品的浪費(fèi)，也許是昂貴的藥物，而且會(huì)增加吸液管污染的可能性，但是，如果你的細(xì)胞并沒(méi)有很好的貼在底物上，造成緊密的seal（沒(méi)有superfusion），那么打開(kāi)superfusion，能很容易的調(diào)整細(xì)胞，打破密封。另一持續(xù)打開(kāi)superfusion的原因是微環(huán)境調(diào)控，除非你能很確定穩(wěn)定和pH值不會(huì)大幅度的變化，那么還是讓superfusion開(kāi)著吧。
吸液管大小
一個(gè)孔徑尺寸大的吸液管有利于整個(gè)細(xì)胞的記錄，這主要是因?yàn)橛?/font>suction pulses容易穿過(guò)細(xì)胞膜，因此在記錄的過(guò)程中不用重新再來(lái)，細(xì)胞質(zhì)中吸液管溶液也可以很快得以交換。因此在整個(gè)細(xì)胞記錄過(guò)程中吸液管的大小是由獲得seals的成功率決定的，可以盡可能的考慮大尺寸的吸液管，電阻大約是2MΩ。另外小孔徑的吸液管適合于單孔道記錄。
選擇正確的角度
要進(jìn)行一次好的密封就需要一次優(yōu)良的接觸，吸液管接觸細(xì)胞的角度通常是45度到60度，在放置吸液管的時(shí)候，試著選擇細(xì)胞上與吸液管軸垂直的部分。這不難，但是在平展的細(xì)胞上可能有些難得，有時(shí)可以利用由細(xì)胞核造成的凸出來(lái)完成。而紡錘形狀的細(xì)胞則可以以90度來(lái)靠近其軸心。
吸出
在靠近一個(gè)擺動(dòng)檢測(cè)脈沖（毫伏）的過(guò)程中就說(shuō)明吸液管“看到”了電阻（電流反應(yīng)越大電阻越低），接近細(xì)胞會(huì)增加電阻，降低電流反應(yīng)。在許多例子中，大約10%的下降就說(shuō)明要關(guān)掉suction，但是不同的細(xì)胞類型有不同的情況，而且超壓應(yīng)用的情況也有影響。也就是說(shuō)，一旦一種細(xì)胞類型建立了可靠穩(wěn)定的規(guī)則，那么就把它記錄下來(lái)。從壓力到吸出的轉(zhuǎn)換（通常是由口來(lái)完成）應(yīng)該是快速和順暢的，如果你離開(kāi)吸液管一會(huì)（沒(méi)有壓力或者sucion），那細(xì)胞膜就會(huì)搖擺，污染吸液管口，無(wú)法完成良好的seal。
承認(rèn)錯(cuò)誤
如果發(fā)現(xiàn)你監(jiān)控的電阻大幅度降低，那么放棄這一次。你的tip將會(huì)被污染，就像上面說(shuō)的那樣，無(wú)法得到好的密封，承認(rèn)錯(cuò)誤，用一只新的吸液管重新開(kāi)始是最節(jié)約時(shí)間的方法。
鑒別和去除漂移
有沒(méi)有在利用顯微操作器（micromanipulator）這種低漂移特征的儀器操作時(shí)，發(fā)現(xiàn)微吸管在顯微鏡下滑動(dòng)？在對(duì)顯微操作器抱怨之前，你需要確保你的操作器已調(diào)節(jié)減少振動(dòng)了。漂移有可能是由于操作器裝載過(guò)重，或者電纜和與headstage接觸的試管扭轉(zhuǎn)力過(guò)大，請(qǐng)盡量避免這些情況的出現(xiàn)。
當(dāng)鉗出來(lái)......
在完成一個(gè)密封（seal）之后，可以加以holding potential。通常你所認(rèn)為的是一個(gè)來(lái)自細(xì)胞的休眠細(xì)胞膜電壓，在吸液管下的膜片將會(huì)被去極化，但是一旦你取出，細(xì)胞將不再能從放大器里獲得強(qiáng)大的電流jolt。這種鉗出可以通過(guò)吸出脈沖（suction pulse）或者電流脈沖（current pulse）完成。吸出對(duì)于尺寸大一些的吸液管（<3MΩ）比較合適，而另一個(gè)則適合于小吸液管（>6MΩ），中間的范圍需要反復(fù)試驗(yàn)，但是一旦你對(duì)你的細(xì)胞有了一套方法，那么就堅(jiān)持下去，有時(shí)一些污染會(huì)騙了你。用小量持續(xù)的suction，而電流脈沖則可以不斷的增加，如果你看到許多噪音出現(xiàn)，回到原來(lái)的suction脈沖。
轉(zhuǎn)自生物通（英國(guó)赫特福德郡大學(xué)細(xì)胞與膜生理學(xué)的Areles Molleman原創(chuàng)）
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